Начало исследований в области ЭКО в СССР

24 September 2013, 6:16 am Автор 
Опубликовано в Наши публикации
Прочитано 9977 раз Последнее изменение Среда, 28 January 2015 21:33

Представлены результаты и основные положения исследования эмбриолога Г.Н. Петрова, выполненных им в стенах Крымского медицинского института в 1955-1959 гг. Эти работы позволили ему уже в 1957 г. сделать вывод «о возможности успешной трансплантации зародышей в матку после их культивирования в течение 2-3 дней вне организма»... В силу известных обстоятельств в те годы эти исследования были несправедливо забыты, и только в наши дни Г.Н. Петров был награжден грамотой «За личный вклад в развитие ЭКО в России».

Адамов М.М., Ткачева Н.Ю., Королев В.А., Турлинова З.А, Золотаревский П.Л. (опубликовано в журнале Проблемы репродукции №5 , 2011 год)

 

Вторая половина прошлого столетия ознаменовалась рядом принципиально новых достижений в области медицины. Среди них особое место занимает экстракорпоральное оплодотворение. Оно качественно изменило наши представления о репродуктивных возможностях человека. Экстракорпоральное оплодотворение у  человека открыло новую эру в репродуктивной биологии. Ныне, в сущности, это уже рутинный метод, давший сотни тысяч «людей из пробирки». В Советском Союзе начало работ в этом направлении было положено в 50-х годах прошлого столетия крымскими эмбриологами, среди которых особо следует выделить роль молодого и талантливого исследователя Г.Н. Петрова. В дальнейшем сформировалось четыре независимых друг от друга группы ученых, которые осуществляли работы по оплодотворению яйцеклетки человека in vitro в условиях клиники. Эти группы работали в Украине и России:

В.И.Грищенко, Ф.В. Дахно — в Харькове,

А.И. Никитин, Э.М.Китаев — в Ленинграде,

В.М.Здановский, М.Б. Аншина — в Москве,

Б.В.Леонов, Е.А.Калинина — в Москве.

Первую  в СССР беременность с использованием экстракорпорального оплодотворения получил Б.В. Леонов в 1986г.

Из истории экспериментальных исследований по оплодотворению яйцеклеток человека in vitro в XX веке

Данные по искусственному оплодотворению и дроблению яйцевой клетки человека к середине столетия были весьма ограничены. Рокк и Минкин (США, 1944г.) после целого ряда неудачных попыток (проделано 800 опытов) только в трех случаях наблюдали дробление яйцеклеток человека вне организма. Через 10 часов после осеменения наблюдалась стадия двух бластомеров. Исследования были прекращены из-за многочисленных неудач. В этом же году Гамильтон (США, 1944г.), ставя опыты по оплодотворению  яйцеклеток человека вне организма, приводит данные только об образовании и выходе направительных телец в околожелточное пространство. Шеттлз (США, 1953г.) проводил исследования по оплодотворению яйцеклеток человека вне организма прижизненно с помощью фазово-контрастного микро­скопа. Яйцеклетки были получены из яичников и фаллопиевых труб у женщин во время операций. Автор отмечает, что сперматозоиды проходят через оболочку яйцеклетки в те­чение 18 минут. Отделение направительных телец происходит через 10—20 часов куль­тивирования. При этом не отмечалось различий в процессах оплодотворения между яйцеклетками, добытыми из фолликулов и вымытыми из маточных труб. Процесса дробления автор не наблюдал. Ему удалось видеть только рассеивание лучистого венца, проникновение сперматозоидов через прозрачную оболочку в перивителлиновое пространство и образование направительных телец. В 1955 г., Шеттлз опубликовал данные о культивировании яйцеклеток человека вне организма в специальных чашках. В одном случае через 72 часа инкубации им была получена стадия морулы, со­стоящая из 32 клеток. Автор отмечает, что бластомеры неодинаковой величины и нахо­дятся в разных фазах деления.

Принципиальным отличием исследований крымских эмбриологов от цитированных выше работ явился системный подход.

Эмбриолог Г.Н. Петров (1955-1957г.г.) подробно проанализировал последовательные стадии оплодотворения у человека в экспериментах in vitro. Они включали: а) сингамию – сближение и слияние гамет; б) формирование синкариона путем соединения гаплоидных ядер половых клеток; в) образование зиготы – нового организма на одноклеточной стадии. Им также прослежены начальные стадии дробления с использованием искусственных питательных сред.

Истоки этой работы приводят нас на кафедру гистологии и эмбриологии Крымского медицинского института. Идейным вдохновителем работ являлся заведующий кафедрой профессор Б.П. Хватов, реальным исполнителем – аспирант Г.Н.Петров. Предварительно была проведена большая серия экспериментов по оплодотворению in vitro яйцеклеток животных, что в конечном итоге позволило осуществить оплодотворение вне организма яйцеклеток человека, полученных из зрелых фолликулов яичников женщин.

Плановое научное исследование Г.Н. Петрова (1954г.) на половых клетках животных по искусственному их оплодотворению в пробирке, а затем в 1955 году на половых клетках человека вне тела матери – внекорпоральное или экстракорпоральное оплодотворение (ЭКО) – оформлено в виде кандидатской диссертации «Процессы оплодотворения яйцеклеток некоторых млекопитающих животных и человека», Симферополь, 1959 г. В диссертацию вошло описание 1100 опытов на кроликах и свиньях и 550 проб человеческого материала.

Присоединяясь к высокой оценке новаторских изысканий крымских эмбриологов, хотелось бы отметить, что судьба научных первопроходцев зачастую случается коварной, если не драматичной.

Оригинальная идея – в силу объективных и субъективных причин, связанных с косностью существовавшей тогда партийно-административной системы, закрытостью научных границ, отсутствием должного финансирования и дефицитных реактивов, провинциализмом подходов - была обречена. В то время следует отметить, что молодой ученый осуществил, по сути, революцию в микроскопической технике. Им были получены тончайшие гистологические срезы из изолированных объектов, практически недоступных невооруженному глазу. Представим полупрозрачный комочек диаметром около 100 мкм. Это яйцеклетка человека. Изготовим из нее парафиновый срез до 5 мкм. Структуру необходимо зафиксировать, затем провести через спирты возрастающей крепости, опустить в ядовитый бензол и быстро перенести в смесь бензол-парафин при 37 градусах. А далее залить объект в парафин и изготовить из него серийные срезы на микротоме. Снимки этих блестящих цитологических препаратов приведены в диссертации Петрова Г.Н., хранящейся в библиотеке Крымского государственного медицинского университета. Микропрепараты Г.Н. Петрова открыли калейдоскоп тончайших превращений в овоплазме. Ранее такие жизненные тайны были скрыты от глаз. Использование столь тонкой технологии связано с тем, что прижизненный анализ процесса оплодотворения затрудняли фолликулярные клетки окружающие ооцит. Дальнейшие стадии дробления яйцеклеток изучались на фиксированном материале путем изучения серийных окрашенных гистологических препаратов.

«Методика исследования по оплодотворению яйцеклеток человека вне организма».

(материал из диссертации Г.Н. Петрова).

«Яичники брались у женщин во время оперативного вмешательства при различных гинекологических заболеваниях в лечебных учреждениях г. Симферополя».

«Обычно зрелые фолликулы в яичниках наблюдались у женщин …, когда операция производилась на …14 день от начала менструального цикла. Зрелые фолликулы величиной до 1-1.5 см. заметно выступали на поверхности яичника».

«Для разбавления и сохранения спермы употреблялась специальная среда, состоящая из стерильного раствора Рингера, в которую помещались небольшой кусочек слизистой яйцевода женщин и 100 ЕД пенициллина. Сюда же добавлялось 5-6 капель проверенной семенной жидкости».

«При получении яйцеклеток фолликулярная жидкость Граафова пузырька вместе с яйцеклеткой помещались в бюкс с питательной средой, к которой затем добавлялось 2-3 капли разбавленной семенной жидкости».

«Лучший эффект оплодотворения и дробления наблюдался при помещении яйцеклеток в специальные бюксы с питательной средой, состоящей из раствора Рингера (5 мм) и фол­ликулярной жидкости (0,5 мл) при температуре 38,5°. К питательной среде добавлялась одна капля проверенной семенной жидкости».

«В различные сроки после осеменения яйцеклетки фиксировались в жидкости Карнуа, в 5% растворе формалина, в фиксаторе Навашина—Крылова. Яйцеклетки предвари­тельно окрашивались кармином и после заливки в парафин разлагались на серийные срезы толщиной в 10—20 мкм. Из каждой яйцеклетки получалось 8—10 срезов, которые докрашивались кармином или железным гематоксилином. Ставилась реакция Фёльгена».
Г.Н. Петрову удалось выделить из маточной трубы женщины бластулу, состоящую из 107 клеток (на этой стадии развития очень хорошо видны процессы дробления). Яйцеклетки для опытов выделяли из яичников, удаленных хирургическим путем при гинекологических заболеваниях. Из фолликулов яйцеклетки брали путем прокола.

Выделенные яйцеклетки помещали в бюксы с питательной средой и сперматозоидами человека. Бюксы помещали в термостат при температуре 38,5 градусов C на сроки от 2 до 30 часов. Для поддержания процессов деления оплодотворенной яйцеклетки испытали целую серию питательных сред. Лучшей оказалась смесь раствора Рингера с фолликулярной жидкостью. После 4 часов пребывания яйцеклеток в смеси ясно обнаружено проникновение большого числа сперматозоидов в перивителиновое пространство и ооплазму яйцеклетки.

На яйцеклетках человека было поставлено 40 опытов. В четырех опытах Г.Н. проследил деление яйцеклеток в срок до 30 часов жизни эмбриона.

Г.Н. Петров выяснил, что сперматозоид вне естественной среды не может проникнуть в яйцеклетку. Ооциты из яичников женщины культивировали в фолликулярной жидкости (из тех же яичников) до зрелости. Потом их смешивали со сперматозоидами. Яйцеклетки добывались путем прокола зрелых фолликулов. Они помещались на предметные стекла с луночкой в различные питательные среды. Все операции произво­дились на нагревательном столике микроскопа в утепленной камере с соблюдением условий стерильности. Группа ученых имела возможность наблюдать процесс оплодотворения и дробле­ния яиц кролика и свиньи. После этого были произведены исследования оплодотворения у человека. Яйцеклетки человека были получены из яичников, удаленных хирургическим путем при различных гинекологических заболеваниях. При этом учитывалась зрелость фолликулов. Лучший эффект оплодотворения и дробления наблюдался при помещении яйцеклеток в специальные бюксы с питательной средой, состоящей из раствора Рингера (5 мм) и фол­ликулярной жидкости (0,5 мл) при температуре 38,5°. К питательной среде добавлялась одна капля проверенной семенной жидкости.

Полученные  из фолликулов неоплодотворенные яйцеклетки живот­ных  и  человека  всегда были покрыты  клетками  фолликулярного  эпителия, образующими лучистый венец. При оплодотворении вне организма рас­сеивание фолликулярных клеток наблюдалось в период наибольшей под­вижности сперматозоидов, т.е. в первые два часа от начала осеменения. «Лучистый венец яйцеклеток человека при оплодотворении вне орга­низма рассеивается равномерно и, как правило, сохраняется значитель­но дольше, чем у исследованных нами животных. Основная масса фолликулярных клеток у человека и животных рас­сеивается к 6 часам инкубации, однако полного рассеивания лучистого венца при оплодотворении вне организма в подавляющем большинстве случаев не наблюдается. Добавление кусочков слизистой яйцевода или вытяжки из нее в питательную среду с яйцеклетками значительно уско­ряло процесс рассеивания фолликулярных клеток, но и в данном случае полного освобождения лучистого венца все же не наблюдалось».

«Сперматозоиды активно внедряются между отдельными клетками венца. В зоне действия каждого живчика выделяемая им гиалуронидаза деполимеризует межклеточное вещест­во — гиалуроновую кислоту. Усиливается проницаемость межклеточной субстанции, падает сила сцепления между отдельными группами фол­ликулярных клеток и решающую роль в денудации приобретают ме­ханические факторы — скольжение и трение яйцеклеток между высоки­ми ворсинками яйцевода. 

Быстро продвигаясь в коридоре многочисленных складок, яйцевая клетка легко теряет клетки венца. Отпавшие эле­менты короны, еще сохраняя определенную степень вязкости, отстают от яйцеклетки, образуя длинный шлейф. В период прохождения яйцеклетки по яйцеводу отмечается усиленная миграция лейкоцитов из слизистой в просвет канала. Лейкоциты при­нимают активное участие в процессах рассасывания образующихся в канале небольших сгустков и фагоцитируют гибнущие фолликулярные клетки. В течение первых трех часов после выхода из фолликула яйцо полностью освобождается от покрывающих его фолликулярных клеток. 

Суммируя полученные данные, необходимо отметить, что рассеива­ние фолликулярных клеток при оплодотворении является активным би­ологическим процессом. У некоторых животных, например у кролика, денудация проходит достаточно интенсивно, так как к моменту овуляции в начальных отрезках ампулы уже имеется необходимое для оплодотво­рения количество спермиев. Нами отмечено, что зрелые яйцевые клетки окружены несколькими слоями (4—6) фолликулярных клеток, образующих лучистый венец, и небольшим числом прилипших к ним клеточек яйценосного бугорка. Фолликулярные клетки поверхностных слоев слабо соединены друг с другом и легко отделяются при прохождении ампулы. Однако, проведенные нами опыты по оплодотворению вне организма показали, что в подавляющем большинстве случаев одни только спер­мин не в состоянии освободить яйцеклетку от клеток венца. В искусст­венных условиях денудация протекает длительно и вяло. Поэтому сле­дует подчеркнуть значение трубного фактора в рассеивании фоллику­лярных клеток. Действие его складывается из ферментативного, что соответствует высказываниям Шеттлс (Shettels,1954), Манзани и Маззелла (Маnsani, Маzzella,1955) и механического влияния стенок трубы на содержимое канала. Механическое действие проявляется при ослаблении связи между отдельными группами фолликулярных клеток, формирующих лучистый венец. Грубый, волнистый рельеф сли­зистой этих отделов значительно облегчает освобождение яйцеклеток от клеток-спутников. Наблюдаемые нами картины рассеивания фолли­кулярных клеток в виде шлейфа или «хвоста кометы» в яйцеводах мле­копитающих становятся понятными, если учесть, что маточные трубы способны не только к перистальтическим, маятникообразным движени­ям, но и совершают вращательно-поступательные (турбулентные) дви­жения. У непокрытых животных рассеивание клеток венца происходит толь­ко под влиянием трубного фактора — ферментативного и механического действия  стенок трубы на клетки лучистого  венца. Деполимеризация межклеточного вещества протекает в таких слу­чаях медленно и особую роль приобретают механические воздействия».

Безусловно, анализируя приведенные в диссертации данные с позиции современных видений эмбриологии, многие наблюдения, приведенные Г.Н. Петровым, являются спорными.

Заслуживающим внимания является также тот исторический факт, что в период написания данной работы уже в 1955г. была решена важная проблема  «губительного действия «семенной плазмы» на женские половые клетки». Г.Н. Петров,разбавляя сперму  специальной средой  (лучшей оказалась смесь раствора Рингера с фолликулярной жидкостью) и добавляя  2-3 капли разбавленной семенной жидкости  к полученной яйцеклетке человека добивался оплодотворения и деления.Крайне интересным является факт выявления учеными полиспермии. «Мы проводим наблюдения, касающиеся проникновения спермиев в яйцо и явлений полиспермии. По нашим данным, как правило, в яйцо кролика и свиньи проникают одновременно несколько сперматозоидов; это видно при изучении яйцеклеток, обнаруженных в яйцеводах, при исследовании «вымытых» яйцеклеток, а так же в опытах с оплодотворением вне организма. Количество проникающих спермиев, как отмечено и другими авторами, может значительно варьировать. Наличие многих спермиев в яйце — физиологическое явление».

С данным явлением столкнется и Роберт Эдвардс, но уже спустя несколько лет от момента решения этой проблемы крымским ученым. По совету британского исследователя отделили сперматозоиды от семенной плазмы, а затем растворили осадок в новой порции среды и получили взвесь мужских гамет способных осуществить свою функцию в пробирке. Оказалось, семенная плазма губительно действует на женские половые клетки. Это  была одна из первых неожиданностей, с которыми исследователи столкнулись в решении поставленной перед ними задачи.

 

Важным наблюдением, согласно проведенных работ, было выявление проникновения сперматозоидов через оболочки яйцевой клетки спустя 2 часа после осеменения (фото 6).

«Видны сперматозоиды, расположенные равномерно по всей окружности прозрачной оболочки яйца. Некоторые спермии внедрены головками в оболочку. Ядро яйцеклетки находится в состоянии митоза в области анимального полюса. Происходит отделение первого направительного тельца. Протоплазма яйцеклеток мелкозерниста в кортикальной части и крупнозерниста в центре. Первое редукционное деление».

 

«Через 17 часов после инкубации некоторые  яйцеклетки уже раздробились на два бластомера. Бластомеры в раздробившихся яйцеклетках имели не одинаковую величину и интенсивность окраски. Более крупный бластомер слабее красителя, его протоплазма имела крупную зернистость, ядро находилось в последней стадии митоза, в то время как ядро темного бластомера находилось в начальной фазе митоза. В раздробившихся яйцеклетках периовуляторное пространство выявлялось только в области анимального и вегетативного полюсов, где находились единичные спермии и направительные тельца. Прозрачная оболочка была гомогенна. В прозрачной оболочке так же, как и в околожелточном пространстве, выявлялись набухшие головки сперматозоидов. Фолликулярные клетки лучистого венца в отдельных яйцеклетках были полностью рассеяны». (фото 32)

«В серии опытов через 24 часа после инкубации одна яйцеклетка была раздроблена до стадии 7 бластомеров. Фолликулярные клетки внутреннего слоя лучистого венца и на данном сроке осеменения были слабо рассеяны. Между фолликулярными клетками и вокруг прозрачной оболочки находилось большое число сперматозоидов. Внутри видны 7 бластомеров. Эти бластомеры неодинакового размера. Протоплазма во всех бластомерах была мелкозерниста, а ядра находились в митотическом состоянии». (фото 33)

 

«Спустя 30 часов после осеменения в одном случае дробление в яйце достигало стадии морулы. Фолликулярные клетки, окружающие морулу, были слабо рассеяны. Между фолликулярными клетками и вокруг прозрачной оболочки располагаются сперматозоиды. Прозрачная оболочка была сохранена, гомогенна, но слабо выявлялась. Исследование показало, что эта стадия  - морула состояла приблизительно из 28 бластомеров. Бластомеры несколько отличались друг от друга по размерам и окраске. Ядра в бластомерах находились в разных фазах митоза». (фото 34)

«После 15 часов от срока осеменения в одной из яйцеклеток было обнаружено два ядра. Одно из этих ядер находилось в кортикальной части протоплазмы, имело овальную форму, небольшие размеры. Хроматин его собран в отдельные глыбки. Второе ядро располагалось по центру яйцеклетки. Оно значительно крупнее первого, с хроматином, представленным мелкими зернами, расположенными равномерно по всей кариоплазме. Первое ядро можно отнести к мужскому пронуклеусу, а второе – к женскому». (фото 65)

 

Григорий Николаевич считал возможным следующие варианты слияния пронуклеусов:

  1. Сливаются два пронуклеуса: мужской и женский;
  2. Сливаются три пронуклеуса: два мужских и один жен­ский;
  3. Сливается два мужских пронуклеуса, при этом женское ядро может не участвовать в этом процессе. Ядро яйцеклет­ки может погибнуть;
  4. Процесс слияния пронуклеусов весьма сложен и мало изу­чен. При слиянии трех или более пронуклеусов, по-видимому, принимает участие не все вещество каждого из пронуклеусов. Слияние может осуществиться в различных вариациях с участием, возможно, разных хромосом.

«В момент слияния при оплодотворении вне организма пронуклеусы имеют одинаковое строение» (фото 67).

«Первые бластомеры яйцеклеток, раздробившихся в культуре, имеют неодинаковые размеры и интенсивность окрашивания. Ядра бластомеров находятся на разных фазах митоза» (фото 71).

При оплодотворении у человека наблюдаются более ярко выраженные изменения величины и структуры ядер яйцеклеток. При дроблении яйце­клетки человека выявляется быстрое истончение прозрачной оболочки. В яйце человека первая борозда дробления начинается так же, как и у млекопи­тающих животных, с анимального полюса, после 18 часов со времени прибав­ления семенной жидкости к среде, в которой находится яйцевая клетка. Асинхронность дробления выявляется уже на стадии двух бластомеров. Ядра этих бластомеров обычно находятся на разных стадиях деления. Аналогичная картина видна во время последующих стадий дробления.

«Яйцеклетка, оплодотворенная в естественных условиях. Фолликулярные клетки полностью рассеяны. В центре протоплазмы  четко вырисовываются два ядра. Видно различие в величине ядер. Центральное ядро является большим – женским пронуклеусом, второе ядро, располагающееся к периферии – мужской пронуклеус» (фото 66).

Хотелось бы отдельно остановиться на выводах, полученными группой крымских ученых при проведении огромного ряда опытов, т.к. 60 лет назад они были действительно революционными в области эмбриологии:

«В яйцеклетках через 4 часа после осеменения обнаруживается много сперматозоидов, находящихся как в перивителлиновом пространстве, так и в цитоплазме клетки, в перивителлиновом пространстве выявляется одно направительное тельце».«Через 2 часа (после «осеменения») – по всей окружности прозрачной оболочки располагается большое количество сперматозоидов, отмечается рассеивание фолликулярных клеток лучистого венца».

 «Через 12 часов – в протоплазме яйцеклетки четко выявлялось два ядра….Эти ядра почти одинаковы по размерам, но различны по форме….Первое ядро можно отнести к мужскому пронуклеусу, а второе к женскому».

«Яйцеклетка человека через 18 часов после осеменения демонстри­рует один из моментов оплодотворения. Ядра яйцеклетки и сперматозоида лежат рядом…наблюдалось последовательное слияние ядер.  Оболочки яйцеклетки сохранены. Клетки лучистого венца рассеяны».

«Спустя 20 часов после осеменения на одном из срезов яйца человека видно появление первой борозды дробления...справа и слева от борозды дробления в ооплазме видны два ядра».

«Через 26 часов – стадия 2х бластомеров .…Каждая клетка (яйцеклетка) разделилась на два неодинаковые по величине и окраске бластомера…. В других яйцеклетках обнаружилась стадия 3х бластомеров».

На основе своих работ впервые в СССР уже в 1957г. группа крымских ученых во главе с Г.Н. Петровым  сделала вывод: «…Данные об оплодотворении и дроблении яйцеклеток в искусственных условиях говорят о возможности успешной трансплантации зародышей в матку после их культивирования в течении 2-3 дней вне организма».

Нет сомнений, что ассистент кафедры гистологии видел и проследил последовательно именно стадии оплодотворения и дробления  яйцеклетки человека in vitro в 1955г!

Несмотря на долгое забвение со стороны ученых, признание, хотя и с опозданием на десятки лет пришло к доценту Петрову. Президент  РАРЧ, профессор В.С. Корсак предложил наградить его грамотой  «За личный вклад в развитие экстракорпорального оплодотворения в России», которую вручили ему уже в г.Симферополе в стенах Крымского медицинского института.

Из уст Григория Николаевича тогда прозвучала следующая фраза: «Я счастлив, что дожил до этих дней, когда вспомнили о моих исследованиях. Думал, что это случится только после моей смерти».

Через 11 дней после данного величайшего и, как в последствии оказалось, завершающего аккордного события в его жизни, великого крымского ученого не стало.

Заключение

С позиций современной теории и практики ЭКО работы Г.Н. Петрова содержат много спорных и ошибочных суждений. В то время это был принципиально новый подход и смелый шаг в изучении репродуктивных возможностей человека. При разветвленной системе эмбриологических центов в СССР крымские эмбриологи профессор Б.П. Хватов и доцент Г.Н. Петров взяли на себя ответственность разработки и внедрения оригинальных медико-биологических методов, связанных с использованием человеческого материала применительно к акушерско-гинекологической клинике. При существующей в 50-ые годы системе партийного надзора за состоянием и развитием естественных наук, ученые легко могли быть обвинены в экспериментах на человеке. Это означало конец научной карьере и осмысленного жизненного пути. События полустолетней давности на эмбриологической кафедре Крымского медицинского института поставили перед социумом  немало морально-этических, правовых, гендерных, психологических проблем.

Литература

  1. Газета Крымского Государственного Медицинского Университета им.С.И. Георгиевского «Медицинский вестник». №15 (1050) октябрь 2010.
  2. Профессор Б.В. Троценко. Газета Крымского Государственного Медицинского Университета им.С.И. Георгиевского «Медицинский вестник». Четыре розы вместо Нобелевской премии. №16 (1051) ноябрь 2010.
  3. Профессор В.А. Королев. Газета Крымского Государственного Медицинского Университета им.С.И. Георгиевского «Медицинский вестник». Четыре розы вместо Нобелевской премии. №17 (1052) ноябрь 2010.
  4. Оригинал статьи Петрова Г. Н. Оплодотворение и первые стадии дробления яйца человека вне организма. Архив анатомии, гистологии и эмбриологии №1. Том XXXV.1955 г.
  5. В. А. Королев, г. Н. Петров. Явление денудации при оплодотворении яйцеклеток  у некоторых млекопитающих животных и человека. Журнал общей биологии. Том xxv. Москва – 1964г.
  6. Б. П. Хватов, г. Н. Петров и в. А. Королев. Оплодотворение и ранние стадии развития млекопитающих животных и человека. Том xxx. Эмбриология и гистология. Симферополь – 1961г.
  7. Григорий  Николаевич  Петров. Сайт кафедры нормальной анатомии человека Крымского Государственного Медицинского Университета. siteanatomy.narod.ru/ist/dc_petr.doc
Оцените материал
(0 голосов)
Vera клиника репродуктивной медицины

Клиника репродуктивной медицины "Vera" использует самые передовые технологии, которые используются с успехом во всем мире, и уже помогла сотням пар со всего Крыма и Украины обрести счастье материнства.

Сайт: www.eko-clinic.com/

Оставить комментарий

JoomShaper